大鼠海马神经元细胞培养和传代流程

　　体外培养大鼠海马神经元细胞细胞周期有限；建议使用与procell配套的专用生长培养基和正确的操作方法进行培养，以保证细胞处于理想培养状态。procell实验室分离的大鼠海马神经元细胞采用胰蛋白酶消化、神经元特异性培养基培养、筛选结合化学试剂抑制制备。细胞总数约为5×105个细胞/瓶。

　　

　　大鼠海马神经元细胞培养和传代流程（请严格按照无菌操作）：

　　

　　1、从原培养瓶中吸出培养基，用PBS缓冲液润湿细胞两次，加入2-3ml025%胰蛋白酶消化细胞（注意消化时间，一般控制在1-2min内）；

　　

　　2、在显微镜下观察消化情况。当细胞边缘收缩松散贴壁时（不建议消化到细胞漂浮），去除胰蛋白酶，加入6-8ml*培养基，轻轻吹干细胞层，尽量吹散细胞层；

　　

　　3、将部分细胞悬液转移至新的培养皿/瓶中，加入适量的*培养基，将细胞悬液打匀，放入培养箱中培养；

　　

　　4、注意培养基pH值的变化，定期更换溶液（每周2-3次），待细胞密度达到80%后重复1次操作或冷冻保存。

　　

　　特别注意：如果使用公共实验室接触大鼠海马神经元细胞培养，建议添加双抗体培养。

　　

　　1、收到细胞后，请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基。如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%血清（原瓶培养基连续使用时间不超过72小时）；

　　

　　2、贴壁细胞在收到当天不要立即消化。请更换细胞溶液，放入培养箱中孵育至次日进行消化和继代培养。请优先使用直径6cm的培养皿进行继代培养；

　　

　　3、培养瓶壁破裂、漏水，请及时拍照记录并与实验室联系。