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在4月28日开播的“常见细胞污染类型及解决方法"课程中，有很多老师就细胞污染提出了疑问。我们筛选出部分代表性问题，并作了详细解答。
01
Q：在细胞培养液中，有种可以游动的虫子是什么污染？
A：是细菌污染。带鞭毛的细菌就是会游动的。
02
Q：有很多黑点，在原位颤抖，没那么明显的定向运动，是什么污染？
A：细胞碎片、血清沉淀和有些细菌污染，都会在原位颤抖。前者是原地做不规律的布朗运动，细菌是原地转动，频率会高很多。
03
Q：血清的絮状物杂质属于正常现象吗？
A：血清里面有一些大分子蛋白和一些纤维析出，呈现絮状，也有一些磷酸钙析出呈现小黑点，这些都是很常见的。沉淀太多，可以离心去掉部分。血清沉淀的多少也跟血清的溶解方式有关，溶解过程中最好是4℃，期间不时摇晃进行溶解。根据普诺赛多年培养细胞经验，血清的沉淀多与少并不决定血清质量。
04
Q：液体变微黄、浑浊怎么解决？
A：这个是典型的细菌污染。如果细胞形态尚且完整，可以尝试用10%的双抗清洗去除，或者使用别的抗生素清除，如庆大霉素50U/mL、四环素10μg/mL等；如果细胞状态已经很差，就没有挽救的价值了。
05
Q：为什么有的培养基天天需要换液呢？
A：正常情况下，是不需要每天换液的。培养基橘黄色是细胞比较喜欢的环境，正常是2~3天换一次比较好，换液多了细胞状态反而容易受影响。如果是因为培养基异常消耗，才需要每天换液，那么我们要做的是找到异常消耗的原因，是细胞量过多，还是有其他细菌或者支原体污染。先找到原因才能不用每天换液。
06
Q：我冻存的细胞，每次复苏养几天就污染了，是什么原因呢？
A：如果冻存前就带进去了污染，那么同一批次的复苏出来都会有污染。这种情况下，可以在复苏当天给予抗生素清除（不能用双抗），如庆大霉素50U/mL、四环素10μg/mL等；如果同一批有复苏没有污染的情况，要考虑复苏过程，建议换一下水浴锅的水和其他试剂耗材再复苏。
07
Q：细胞培养不生长，传代扩不起来，是不是就是支原体污染？
A：支原体污染肉眼是很难区分的，支原体污染会导致细胞状态变差，但是细胞状态变差并不是都是支原体造成的，所以我们还是要用支原体检测加以区分。
08
Q：培养基污染以后，可以过滤一下继续使用吗？
A：不建议继续使用。培养基里面可能会有残留的细菌分泌物，比如内毒素等，可能会影响细胞生长。
09
Q：培养箱水盘用什么抑菌剂？
A：传统方法用硫酸铜，但是硫酸铜属于重金属，还是有一定的毒性的。建议使用水浴锅安全卫士，安全无毒，可以持续一周无菌状态。
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Q：试剂已经全部换新的了，还是一直污染，是什么原因？
A：如果试剂盒耗材全部更换了，还需要排除下冻存前是否有污染。再就是是否存在操作问题，可考虑换其他人养一下试试。
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Q：悬浮细胞碎片形成的黄团怎么处理呢？
A：悬浮细胞碎片形成的黄团可以通过低速离心去除，前提是细胞量一定要够多，转速一般可以降低到800rpm左右。离心完上清别急着丢，先看下细胞是否已经离心下来，也可以根据细胞大小调节离心转速。
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Q：细胞里面有一些小方块一样的东西，是什么原因？
A：小方块一般是结晶类的。可以先用培养基或者PBS稀释溶解后换液，看有没有改善。
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Q：放了五个月的*培养基，出现絮状悬浮物，但是观察不是细菌，可以过滤后加点血清继续使用吗？
A：不建议继续使用。絮状物首先要排除霉菌类的污染；即使排除了霉菌，完培产生絮状物析出了，也会对成分有一定的影响，影响后期培养细胞。
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Q：饲养杂交瘤细胞，如果观察有没有污染，大概要在多大倍镜下观看？
A：观察污染的话400倍镜就够了，10X目镜加40X物镜。
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Q：请问贴壁细胞表面有白膜，培养液恶臭，是什么原因导致的污染？
A：有白膜和恶臭应该是有污染无疑了，还很严重，具体是细菌还是真菌，要结合显微镜下的菌体形态来进一步区分。
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Q：细胞污染后，用10倍双抗处理后，没有再长，这时细胞可以冻存吗？
A：细菌不再生长，恢复正常1%抗生素后一周内没有再长起来，就是清除干净了，可以冻存。
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Q：孵箱中一瓶细胞有黑胶虫污染，慢慢地整个孵箱都有污染了，那孵箱怎么打扫？
A：把细胞全部转移走，再用消毒液把培养箱全部擦拭一遍；培养箱水一定要清理干净；培养箱角落和表面都喷上细胞房卫士，关闭培养箱保持30分钟，再打开散气30分钟，换上干净的无菌水就行了。
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Q：请问培养箱灭菌水多久换一次呢？换的时候每次都要90℃灭菌么？
A：水浴锅的灭菌水不加抑菌剂的话，建议是每次复苏前都更换新的；加了水浴锅安全卫士，可以一周换一次，水是121℃灭菌20分钟。
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Q：液氮有没有可能污染？
A：理论上液氮这种极-端的环境里，是不会有生物存活的，细菌冻存也是需要保护剂的。
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Q：新复苏的细胞，一天后正常贴壁，但是培养液里悬浮大量的黑色团块，是什么原因呢？
A：可能是有细菌污染了，还是要结合显微镜下的黑团形态来进一步确诊。
5月直播课“细胞传代增殖问题"，将于5月26日开播，大家记得关注哦~
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