大鼠心肌细胞培养需要注意哪些问题

　　H9c2 (2-1)大鼠心肌细胞是一株由Kimes·B和Brandt·B从BD1X大鼠胚胎心脏组织的克隆细胞株亚克隆得到的细胞株；H9c2(2-1)细胞表现出许多骨骼肌的特性。H9c2(2-1)细胞中的成肌细胞能融合形成多核的肌管，并对乙酰胆碱的刺激发生反应。如果培养基中的血清浓度下降到1%，H9c2(2-1)细胞融合发生得很快。
 

　　培养大鼠心肌细胞时，需要注意以下几点：
 

　　1、鼠龄选择：新生1～3d龄大鼠的心肌细胞在出生后3d内具有部分的增殖能力，而成年大鼠的心肌细胞则为终末分化细胞，不再具有分裂增殖能力。因此，建议选择1～3d龄的大鼠进行原代培养以获得更多活性心肌细胞。
 

　　2、细胞复苏：溶解细胞过程要迅速，已溶解的冻存细胞不能在常温下存放太久，需要尽快离心去除DMSO。
 

　　3、细胞冻存：推荐配比为55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO的冻存液。在冻存时，尽量吹散细胞并注意控制吹打力度。
 

　　4、细胞培养：培养条件为培养基：DMEM+10% FBS+1% P/S，推荐传代比例为1:2～1:4，换液频率为2～3次/周，培养箱温度设定为37℃，5% CO2。传代操作包括：去掉培养皿中的培养基，加入PBS进行冲洗，去上清后加入0.25%胰酶进行润洗，去上清后放入CO2培养箱消化2～4min，加入培养基终止消化并吹打均匀。
 

　　5、注意保持细胞汇合度在30%～90%，避免细胞过度生长和分化。
 

　　6、每一步操作都要轻柔小心，以免对细胞造成损伤。
 

　　7、选用优质培养基，减少有害物质对细胞的刺激。