直播答疑 | 细胞培养答疑专场

消化时间过长会导致细胞膜蛋白的改变，最直观的表现就是消化后第二天漂浮细胞很多或者贴壁慢。

建议二次消化。细胞与细胞间的连接没有通过酶切开的话，用移液枪进行吹散后细胞会被撕裂，直接导致细胞不贴壁甚至死亡。

悬浮细胞聚团，要分情况进行处理：

▪ 原本就是聚团生长的细胞，不用干预，比如NK-92等就是聚团生长；

▪ 如果是非聚团生长的细胞，比如THP-1聚团了，要区分高密度和低密度。高密度可以轻轻吹散细胞后进行低速离心，去除里面夹杂的死细胞，正常传代即可改善；

▪ 非聚团生长的细胞低密度时，聚团一般是细胞状态不太好，需要调整状态。排查是否有污染以及培养环境合不合适等问题，对症改善后细胞即可正常生长，聚团改善；

▪ 刚复苏的悬浮细胞也会出现聚团，一般是静置培养和少动，期间可以用补液和半换液的方式培养，等细胞密度长起来，生长至对数生长期时，团块问题也会改善。

这个情况比较符合血清沉淀或者细胞碎片分泌物之类的，一般不用过于关注，细胞能够茁壮生长就可以了。

如果是猪的肺组织提取的原代巨噬细胞，一般是终末分化的细胞，是不能增殖的，只能转移到孔板做实验。

一般要做分泌蛋白都是不建议加血清的。血清里面可能有一些蛋白类未知成分，不排除会和实验的目标蛋白有反应或者类似，所以通常都是用的无血清。

原代组织分离后体外培养通常会有类似的问题，需要选择合适的包被试剂进行辅助贴壁，这是原代提取比较常见的操作。

首先是细胞消化后尽量成单颗，铺板的时候需要练习下手法，不要有旋涡产生，导致分布不均匀；除开铺板手法外，细胞本身特性导致的容易聚团生长，可以尝试包被培养瓶以后低密度接种细胞，可能会达到比较好的单层贴壁的情况。

胰蛋白酶属于酶制品，受温度影响，反复的4℃- 37℃的温度波动反而会导致酶失活，效果不好，所以不建议37℃复温。4℃拿出来可以直接用，加入到细胞消化的时候放进培养箱就好了。

这种情况一般还是消化不充分导致，建议可以适当延长消化时间，待细胞与细胞间的连接打开后再进行吹散，一般是很容易吹散的。