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细胞爬片是一种将细胞培养在玻璃或塑料表面上，使其附着并扩展的技术。一般是让玻片浸在细胞培养基内，使细胞在玻片上生长。这种技术可以用于观察细胞形态、运动、细胞与细胞之间相互作用等。利用细胞爬片进行体外实验可排除体内诸多干扰因素的影响，方便对细胞进行各种干预处理。
我们在做免疫荧光（IF）、原位杂交（FISH）、凋亡检测（TUNEL）等实验时，都需要制备细胞爬片，而爬片质量会影响到最后的图片呈现效果以及实验数据的精准性。本期细胞学堂为大家整理了细胞爬片的制作步骤及注意事项，帮助您快速上手开展实验。
操作步骤
01
爬片准备
1
根据实验选择合适大小的爬片。
2
爬片处理，首先浸酸：5%稀盐酸浸泡过夜（最好逐片浸入，多片同时浸入会引起多片粘连、浸洗不充分），第二天先用自来水冲洗20次，再用三蒸水冲洗2次（清除残留酸液）。
3
将爬片置于无水乙醇浸泡过夜（浸洗脂类污渍），75%乙醇长期保存备用（无需高压灭菌）。使用时镊子取出爬片，酒精灯烘烤，放入孔板。
02
细胞爬片
1
收集贴壁细胞进行计数，按照实验需求用完-全培养基稀释细胞至合适浓度。
2
加细胞前，先在每个孔里准备放爬片的位置滴加少量培养基（目的是使爬片与培养皿靠液体的张力粘合到一起），然后轻放爬片（注意不要产生气泡，防止加细胞悬液时爬片漂起）。整个过程注意无菌操作。
3
根据实验需求接种合适细胞量到培养器皿内。
03
爬片的固定
固定液的选择：
以多聚甲醛为例进行固定：
1
准备4%多聚甲醛（PFA），于4℃冰箱中保存，使用时常温复温。
2
在培养板中将已爬好细胞的爬片用PBS浸洗3次，每次3 min，轻轻晃动，避免将细胞冲掉。
3
用4%的多聚甲醛固定爬片15 min（细胞自带荧光时注意避光），PBS浸洗爬片3次，每次3 min。
4
Triton X-100（PBS配制，浓度根据实验调整）室温通透20 min。
5
PBS浸洗爬片3次，每次3 min。
6
按实验需求进行后续实验。
04
细胞爬片封片
封片前根据实验需求决定是否需要孵育抗体或复染核。孵育好后用PBS浸洗3次，用吸水纸吸干爬片上的液体，封片液封片。
注意事项
注：各个实验室的操作流程都各有差异。此方案是我们实践验证可行的方案。
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