直播答疑 | 细胞培养实验室的环境要求和监测方法

在正常情况（未出现污染）下，培养箱的水盘应使用75%酒精擦拭消毒，然后加入无菌水并添加适量的抑菌剂。当培养箱出现污染时，可以使用新洁尔灭消毒液或3%的过氧化氢消毒液对水盘进行消毒，消毒时间为30 min。此外，也可以使用紫外灯进行消毒处理，消毒完成后用无菌水擦拭干净，添加无菌水和抑菌剂后正常使用。

培养箱内的HEPA过滤器一般不需要单独清洁，当使用出现异常时可以进行更换（需要专业维修人员更换）。对于超净工作台和生物安全柜中的过滤器，只需根据实际使用情况，定期（半年至一年）更换初效滤网即可。

使用消毒液消毒，时间30 min左右即可；若使用的消毒液存在腐蚀性，应在消毒完成后使用无菌水将消毒液擦拭干净。使用臭氧或紫外灯的消毒时间一般也是30 min。

如果需要检测泄漏至空气中的CO₂浓度，防止其浓度过高可能引发的窒息风险，可以使用专门的CO₂浓度检测仪，或者使用氧气浓度监测仪（适用于多种气体环境，如含CO₂或氮气的）。

如果是要检测管道泄漏的位置，初步的检查方法可以是使用肥皂水在管道的接头位置进行涂抹，观察是否出现气泡；如需要准确检测，则需专业人员使用专业检测工具进行检测。

实验服在清洗完成之后，可以放在专用的灭菌袋中，再放进高压蒸汽灭菌锅进行灭菌处理。灭菌完成后，将实验服连同灭菌袋一起放入烘箱中烘干备用。

臭氧消毒适用于配套有新风系统的实验室。臭氧一般需要通过新风系统进入实验室空间，并在空间内达到一定浓度才能起到较好的消毒效果。消毒完成之后，也需要通过新风系统将残留的臭氧排出实验室，否则会对实验室环境产生影响。

细胞状态不好的因素有很多，首要且关键的一步是排除污染因素。如果通过各种检测手段（细菌、真菌通过琼脂板或空培检测，支原体使用试剂盒检测）都无法检测到污染，则可能不是因污染导致的。

如果仍怀疑存在污染，可以尝试向培养物中添加适当浓度的广谱抗生素。如果添加抗生素后细胞状态明显好转，说明确实存在某种难以检测的微生物影响细胞状态；如果添加抗生素后细胞状态未出现好转甚至更差，则需从其他方面排查细胞状态不好的原因，如培养基成分、培养条件、细胞特性或外部操作因素等。