几种常见的细胞污染类型及处理方法

凡混入细胞培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为细胞污染，细胞污染不能*被消除，但能减少其发生的频率和后果的严重性。本文将简要介绍几种常见的细胞污染类型及处理方法。常见细胞污染类型细胞细菌污染特征：大小在0.5~5μm，比动物细胞小很多。多呈球状或杆状，形态规则，分布均匀；增殖速度快，一般细菌污染后48~72小时爆发式增殖；营养消耗快，培养基很快变黄，变浑浊；镜下观察有明显的定向运动。处理方法：轻度细菌污染可用10X双抗清洗处理，重度细菌污染建议消杀后丢弃...

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细胞冻存与复苏的技术原理和操作步骤

细胞冻存与细胞复苏，是细胞培养过程中的常见工作。细胞冻存，是指将细胞贮存在超低温环境中，使细胞暂时“冬眠”的技术，在需要的时候再进行复苏。细胞复苏，是把冻存在-80℃冰箱或液氮中的细胞快速解冻，并使细胞重新恢复生长的技术。本文将为大家介绍细胞冻存与复苏的技术要点和操作步骤。细胞冻存篇冻存原则细胞冻存原则为“慢冻”，即让细胞在缓慢降温的条件下逐渐冷冻。如果直接将细胞悬液放在超低温下快速冷冻，细胞会受到冷冻损伤而死亡。在冻存液中添加的保护剂（如DMSO、甘油）和在冻存盒中添加的异...

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细胞长得慢、传代不易贴壁，该怎么挽救？

各类细胞产品是我们做实验研究的基础，一支小小的细胞，关乎我们各种实验的成功与否，细胞的”小事情“，在实验中都是”大事情“，如果你的细胞出现生长缓慢、不贴壁等情况，那你可要注意了，这就是细胞状态不好的信号，要及时“挽救”，不然很有可能细胞就濒临死亡。问题一：细胞生长缓慢细胞长得慢是细胞培养过程中比较常见的问题，一般来说，细胞活力和浓度一直是细胞健康的标志，细胞长得慢的话，活力和浓度可能都会直线下降。造成细胞生长缓慢的主要原因及解决方法：1，新配置的培养基以及换了新的血清，细胞不...

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Annexin V流式检测细胞凋亡的数据分析方法

示例：细胞用FITC-AnnexinV/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒检测效果图。Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin)(左)或未加药(右)处理4h，FITC-AnnexinV/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后，流式细胞仪荧光检测。AnnexinV-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞，AnnexinV-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况，检测仪器等的不同而存在差异，图中数...

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细胞传代时间经验技巧

养细胞的小伙伴们都知道，细胞一定要传代，因为细胞在培养过程中不断的繁殖，数量也随之增加，然而培养皿/培养瓶的空间有限，增殖受到抑制，所以必须将一部分细胞移至别的培养皿/培养瓶，让细胞有足够生长空间。细胞传代也不仅仅是为细胞安一个更大的“家”，更重要的，是使细胞系或细胞株进一步增殖，这样，我们才能有足够的细胞做各种各样的实验。但是，对于传代的时间，很多小伙伴都掌握不好，因为对于不同的细胞来说，判断能否开始传代的标准略有不同，今天，我们就主要来聊一下，细胞传代的时间问题。什么时候...

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如何避免胎牛血清沉淀物的产生

胎牛血清中可能出现的沉淀物是什么？①纤维蛋白，它是经常出现的较大的沉淀物，可以达到1-2mm，可以用肉眼观察到。②磷酸钙，它也是常见的一种沉淀物，通常会使血清出现浑浊，并且在37℃培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。③胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质，它们也是血清中出现沉淀物的常见原因。关于细胞生长，我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养，我们的客户以及其它血清生产商也证明了这一点。那...

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细胞的冻存与复苏

一、程序冻存步骤（需梯度降温）1、配置冻存液，冻存液推荐配比：55%（基础培养基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；推荐使用Procell通用血清型程序冻存液，货号PB180436；2、制备好的细胞悬液计数，计算总细胞量；3、细胞离心后尽量吸干净上清，离心转速1200rpm（250g）3min；4、加入配置好的冻存液重悬，调整细胞浓度为3×106~1×107cells/mL；5、分装入冻存管，一个冻存管分装1~1.5毫升；6、推荐使用程序降温...

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原代细胞的取材和分离方法

将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。原代细胞培养的步骤一般是：取材→分离→培养和维持，今天我们重点介绍原代细胞的取材和分离方法。一、取材人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。取材的基本要求：①取材要注意新鲜和保鲜②应严格无菌③防止机械损伤④去除无用组织和避免干燥⑤应注意组织类型、分化程度、年龄等⑥作...

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